奥根诊断认为，能够准确检测sC5b-9的单克隆抗体必须同时满足两个条件：只在C9完成聚合后识别目标结构，同时对血液中大量单体C9及其他游离终末补体成分保持沉默。围绕这一标准，奥根诊断研发团队历时两年多，完成多轮免疫、融合、筛选、反筛和亚克隆，最终锁定自主研发的AD99单克隆抗体。
奥根诊断的抗体标准不只是“能够结合C9”，而是只在C9聚合形成终末复合物后产生特异信号。
图1｜AD99筛选强调“聚合C9阳性”与“游离成分阴性”的双向标准。
奥根诊断的答案：目标不是 C9，而是聚合后的新生表位
AD99面对的是一个构象问题。C9以单体形式存在于血浆中时，目标空间构象尚未形成；当C9被募集到C5b-8并与相邻C9亚基共同组装时，两个相邻亚基的表面在空间上靠近，产生新的四级结构表位。公开研究已经证明，poly-C9相关新生表位可以由相邻C9共同构成，并可被构象特异性单抗识别。基于内部功能筛选和结构建模，AD99被用于识别这一聚合状态，而不是把所有含C9的分子都当作阳性。精确的原子接触位点仍应以正式表位解析为准。
从阳性孔到单克隆：每一轮都在排除干扰
奥根诊断的杂交瘤筛选从聚合C9免疫开始。免疫动物产生的B细胞与骨髓瘤细胞融合后，研发人员先从大量培养孔中寻找对聚合C9有反应的阳性孔；随后立即进行反向排除：凡是对单体C9、C5b、C6、C7等游离成分出现明显信号的孔，即使对聚合C9反应很强，也不会进入下一轮。候选细胞再经过有限稀释亚克隆、重复培养、冻存复苏和批次一致性验证，确认单克隆来源和分泌稳定性，最后进入捕获抗体与检测抗体的配对筛选。
ELISA证据必须同时证明特异性与剂量依赖
合格的ELISA证据应同时回答两个问题。第一，特异性：在相同或具有挑战性的抗原浓度下，单体C9以及C5b、C6、C7等组分的OD450应接近空白，而sC5b-9或聚合C9应产生清晰信号。第二，剂量依赖：随着sC5b-9标准品浓度升高，OD450应呈连续、可重复的梯度变化，而不是只有单点阳性。
图2｜左图为特异性筛查数据；右图线性范围为15.625–250 ng/mL。
双重结构确认，减少“抓错分子”
在AlloDx CompliTCC™ sC5b-9 ELISA Kit的双抗夹心体系中，AD99承担“聚合C9状态确认”，另一株检测抗体承担“C5b结构域确认”。单体C9无法同时满足这两个条件；游离C5b、C6或C7同样无法形成完整夹心。只有包含C5b并呈现聚合C9新生表位的sC5b-9，才会产生最终读数。这种双重结构确认，比单纯追求某一株抗体的高亲和力更重要，因为检测的核心不是“抓得多”，而是“抓得对”。
AD99的研发过程体现了奥根诊断对补体检测的基本标准：每一个项目都要先问清楚抗体识别的是哪一种分子状态，再验证它是否会把前体、裂解片段或同源复合物一并读入。自主研发AD99及其配对体系，构成了奥根诊断CompliTCC™ sC5b-9检测方法的核心技术基础。
AlloDx CompliTCC™ 以自主研发AD99为核心，从抗体表位层面提高对完整sC5b-9复合物的选择性。
参考资料
1. Hugo F, Jenne D, Bhakdi S. Monoclonal antibodies against neoantigens of the terminal C5b-9 complex. Biosci Rep. 1985;5:649-658. PMID: 2415178.
2. Kusunoki Y, Takekoshi Y, Nagasawa S. Using polymerized C9 to produce a monoclonal antibody against a neoantigen of TCC. J Pharmacobiodyn. 1990;13:454-460. PMID: 2290128.
3. The neoepitope of complement C5b-9 MAC is formed by proximity of adjacent ancillary regions of C9. 2023. PMID: 36639734.